MiR-205调控非小细胞肺癌细胞发生上皮—间充质转化过程的机制研究

【摘要】背景和目的：世界范围内，肺癌的发病率和死亡率逐年升高，明确肺癌尤其是非小细胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer,NSCLC）的发病机制，对个体化治疗极其重要。上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymaltransition，EMT）使肿瘤细胞获得了侵袭转移能力，构成了肿瘤从原发灶转移的第一步。有研究证实miR-205在乳腺癌中通过调控转录因子ZEB1、ZEB2的表达来调控肿瘤细胞EMT过程的发生。本研究拟探讨：1.miR-205是否参与调控非小细胞肺癌细胞发生EMT过程；2.miR-205通过何种途径调控非小细胞肺癌细胞发生EMT过程。方法：（1）根据文献报道采用5ng/mlTGF-β1刺激非小细胞肺癌细胞A549，H226，观察细胞的形态学改变；然后提取这两株细胞刺激前后的RNA和蛋白，运用Real-timePCR、免疫组织化学、WesternBlot方法检测细胞中上皮标记分子E-cadherin以及间充质标记分子N-cadherin、Vimentin在RNA以及蛋白水平的表达；（2）运用Real-timePCR方法检测A549和H226细胞在5ng/mlTGF-β1刺激前后miR-205、ZEB1、ZEB2的表达；（3）在A549、H226细胞中瞬时转染miR-205mimics及阴性对照(negativecontrol，NC)，48h后应用Real-timePCR方法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1、ZEB2的表达；（4）在A549、H226细胞中瞬时转染miR-205mimics及NC，48h后予以5ng/mlTGF-β1刺激，继续培养48h后运用WesternBlot方法检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达。结果：（1）5ng/mlTGF-β1刺激A549，H226细胞后，细胞形态均呈梭形改变，且上皮标记分子E-cadherin表达明显下降，而间充质标记分子N-cadherin，Vimentin表达上升，提示两株细胞均发生了EMT过程；（2）在A549和H226细胞中，miR-205在TGF-β1刺激后有不同程度下降；而转录因子ZEB1、ZEB2在TGF-β1刺激后均有显著上升；（3）瞬时转染miR-205mimics及NC后，在A549细胞中E-cadherin表达上升、ZEB1、ZEB2表达下降，而N-cadherin、Vimentin的表达没有显著变化；在H226细胞中，E-cadherin表达上升，N-cadherin、Vimentin、ZEB1、ZEB2表达均显著下降。（4）瞬时转染miR-205mimics及NC48h后,再次予以5ng/mlTGF-β1刺激48h，发现在A549细胞中，NC组中经TGF-β1刺激后E-cadherin表达显著下调，相对应的mimics组中E-cadherin下调没有NC组中明显。而N-cadherin、Vimentin刺激前后的表达变化在两组中没有显著差异。在H226细胞中，NC组中经TGF-β1刺激后N-cadherin、Vimentin的表达均有不同程度的上升，而mimics组则没有显著变化。结论：我们的结果显示5ng/mlTGF-β1可刺激肺癌细胞A549和H226发生EMT过程。在A549细胞中miR-205可能通过下调转录因子ZEB1和ZEB2的表达来上调E-cadherin的表达，从而抑制细胞EMT过程的发生；而在H226细胞中，异位表达的miR-205可能通过抑制转录因子ZEB1和ZEB2的表达来下调N-cadherin、Vimentin的表达，从而抑制细胞EMT过程的发生。
【作者】沈旦；
【导师】黄建安；
【作者基本信息】苏州大学，内科学，2014，硕士
【关键词】上皮-间充质转化；miR-205；非小细胞肺癌；

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